کاربرد میکروسکوپ فلورسانس انعکاس داخلی کل فلورسانس
TIRFM (میکروسکوپ فلورسانس بازتاب داخلی کل)، میکروسکوپ فلورسانس بازتاب داخلی کل، هنگامی که نور از محیطی با ضریب شکست بالا وارد محیطی با ضریب شکست پایینتر میشود، اگر زاویه برخورد به اندازه کافی بزرگ باشد، تمام نور بدون شکست منعکس میشود. اما در رابط بین دو رسانه امواج فروپاشی تولید می کند که می تواند فلورسانس را در 100 نانومتر در نزدیکی رابط تحریک کند تا مشاهده سطح جسم را درک کند. نور تحریک را می توان از طریق روشن کننده یک میکروسکوپ فلورسانس معمولی یا یک روشن کننده خاص ارسال کرد و زاویه برخورد لیزر را می توان کنترل کرد. روش تحریک میدان لحظه ای برای جلوگیری از ورود نور تحریک به آشکارساز استفاده می شود. نور تحریک در سطح مشترک بین شیشه و آب یک فضای داخلی کامل را ایجاد می کند که توسط انعکاس اجرا می شود. با توجه به تضعیف نمایی نور تحریک، تنها ناحیه نمونه بسیار نزدیک به سطح بازتاب کل، انعکاس فلورسانس ایجاد می کند، که تا حد زیادی تداخل نویز نور پس زمینه را به هدف مشاهده کاهش می دهد، بنابراین این فناوری به طور گسترده در مشاهده دینامیکی استفاده می شود. از مواد سطح سلولی
نمودار شماتیک میکروسکوپ فلورسانس بازتاب داخلی کل (TIRFM)
①نمونه ②محدوده موج ناپایدار ③شیشه پوششی ④غوطه وری در روغن ⑤هدف ⑥پرتو انتشار (سیگنال) ⑦پرتو تحریک
برای دستیابی به انعکاس داخلی کلی، یک زاویه برخورد بزرگ مورد نیاز است، به عنوان مثال، زاویه برخورد در سطح مشترک آب شیشه ای بیشتر از 61 درجه است. این را می توان با یک منشور، به نام TIRFM مبتنی بر منشور، یا توسط یک لنز شیئی با دیافراگم عددی بالا، که TIRFM از نوع شیئی نامیده می شود، به دست آورد. میکروسکوپ های فلورسانس بازتاب داخلی کلی تجاری فعلی عموماً از نوع عدسی شیئی با سرعت بالا و دقت بالا هستند.
میکروسکوپ فلورسانس بازتاب داخلی کل به طور گسترده در برخی از زمینه های بیولوژیکی استفاده می شود زیرا می تواند مشاهدات فلورسانس را در یک محدوده بسیار نازک (کمتر از 100 نانومتر) روی سطح اجسام انجام دهد. مانند برنامه های کاربردی زیر:
مشاهده تصاویر سطح سلول: ساختار سطح غشای سلولی، تماس با سطح سلول، پویایی سطح غشاء/محلی سازی پروتئین.
مشاهده و دستکاری تک مولکولی: میوزین، اکتین، و ATP نشاندار Cy3-.
حرکت سطح غشای سلولی: مانند غرق شدن وزیکول، بازدم وزیکول و برون ریز وزیکول. را
مشاهده پدیده جرقه کلسیم در غشای سلولی، پایش کانال یونی.
تحقیقات موتور مولکولی: موتورهای چرخشی، پروتئین های اسکلت سلولی، پلیمرها، پروتئین های G، پروتئین های حلقه، موتورهای نوکلئوتیدی.
علاوه بر رشته زیست شناسی، در زمینه شیمی نیز برای مشاهده ساختارهای مولکولی شیمیایی کاربردهای خوبی دارد.
