کاربرد و استفاده از اصول میکروسکوپ فلورسانس

کاربرد و استفاده از اصول میکروسکوپ فلورسانس

اصول و ویژگی‌های ساختاری میکروسکوپ‌های فلورسانس: میکروسکوپ‌های فلورسانس از یک منبع نور نقطه‌ای با بازده نوری بالا برای ساطع نور با طول موج مشخص (مانند نور فرابنفش 3650 اینچ یا نور بنفش-آبی 4200 اینچ) از طریق یک سیستم فیلتر رنگی به عنوان نور تحریک استفاده می‌کنند. فلورسانس را در نمونه تحریک می کند. پس از اینکه ماده فلورسانس با رنگ های مختلف ساطع می کند، سپس از طریق بزرگنمایی عدسی شیئی و چشمی مشاهده می شود. به این ترتیب، تحت یک پس زمینه متضاد قوی، حتی اگر فلورسانس بسیار ضعیف باشد، به راحتی قابل تشخیص است و از حساسیت بالایی برخوردار است. این عمدتا برای مطالعه ساختار و عملکرد سلول و همچنین ترکیب شیمیایی استفاده می شود. ساختار اصلی یک میکروسکوپ فلورسانس از یک میکروسکوپ نوری معمولی به همراه برخی لوازم جانبی (مانند منبع نور فلورسانس، فیلتر تحریک، تقسیم کننده پرتو دو رنگ، فیلتر مسدود کننده و غیره) تشکیل شده است. منبع نور فلورسنت - به طور کلی از یک لامپ جیوه ای با فشار فوق العاده (50 تا 200 وات) استفاده می کند که می تواند نور با طول موج های مختلف ساطع کند، اما هر ماده فلورسنت دارای طول موج تحریکی است که قوی ترین فلورسانس را تولید می کند، بنابراین یک فیلتر تحریک (به طور کلی وجود دارد. فیلترهای تحریک ماوراء بنفش، بنفش، آبی و سبز) که فقط به نور تحریک با طول موج مشخصی اجازه عبور می دهد و نمونه را روشن می کند، در حالی که تمام نورهای دیگر را جذب می کند. پس از تابش هر ماده توسط نور تحریک، فلورسانس مرئی با طول موج بیشتر از طول موج تابش در مدت زمان بسیار کوتاهی ساطع می کند. فلورسانس خاص است و به طور کلی ضعیف تر از نور تحریک است. به منظور مشاهده فلورسانس خاص، یک فیلتر مسدود کننده (یا سرکوب کننده) در پشت عدسی شیئی مورد نیاز است. این دو عملکرد دارد: یکی جذب و جلوگیری از ورود نور تحریک کننده به چشمی برای جلوگیری از ایجاد اختلال در فلورسانس و آسیب دیدن چشم. دیگری انتخاب و اجازه دادن به فلورسانس خاص برای نشان دادن یک رنگ فلورسانس خاص است. این دو فیلتر باید با هم انتخاب و استفاده شوند.