مزایای پیشرفت در میکروسکوپ های چند فوتونی اسکن لیزری

مزایای پیشرفت در میکروسکوپ های چند فوتونی اسکن لیزری

میکروسکوپ مولتی فوتونی اسکن لیزری پیشرفت قابل توجهی در میکروسکوپ نوری است که عمدتاً در توانایی مشاهده ساختارهای عمیق سلول‌های زنده، سلول‌های ثابت و بافت‌ها، و به دست آوردن ساختارهای چند لایه Z{1} شفاف و واضح، یعنی برش‌های نوری، که می‌توانند برای ساختن سه ساختار{2} نمونه جامد استفاده شوند، آشکار می‌شود. میکروسکوپ کانفوکال از یک منبع نور لیزری استفاده می کند که منبسط می شود تا کل صفحه کانونی عدسی شیئی را پر کند و سپس از طریق سیستم عدسی عدسی شیئی به نقاط بسیار کوچکی در صفحه کانونی نمونه همگرا می شود. با توجه به دیافراگم عددی عدسی شیئی، قطر نقطه روشنایی روشن حدود 0.25{14}}0.8 میکرومتر و عمق آن حدود 0.5-1.5 میکرومتر است. اندازه نقطه کانونی با طراحی میکروسکوپ، طول موج لیزر، ویژگی های هدف، تنظیمات حالت واحد اسکن و ویژگی های نمونه تعیین می شود. محدوده روشنایی و عمق یک میکروسکوپ میدانی زیاد است، در حالی که نور یک میکروسکوپ کانفوکال روی یک نقطه کانونی در صفحه کانونی متمرکز است. مزیت اصلی میکروسکوپ کانفوکال این است که می تواند برش نوری ظریفی را بر روی نمونه های فلورسنت ضخیم (تا 50 میکرومتر یا بیشتر) با ضخامت تقریباً 0.5 تا 1.5 میکرومتر انجام دهد. مجموعه ای از تصاویر برش نوری را می توان با حرکت دادن نمونه به بالا و پایین با استفاده از موتور پله ای محور Z میکروسکوپ به دست آورد. مجموعه اطلاعات تصویر در صفحه * * بدون تداخل سیگنال های ساطع شده از موقعیت های دیگر روی نمونه کنترل می شود. پس از حذف تأثیر فلورسانس پس‌زمینه و افزایش نسبت سیگنال به نویز، کنتراست و وضوح تصاویر هم کانونی به طور قابل‌توجهی در مقایسه با تصاویر فلورسانس با نور میدان سنتی بهبود یافته است. در بسیاری از نمونه‌ها، اجزای ساختاری پیچیده در هم تنیده می‌شوند تا سیستم‌های پیچیده را تشکیل دهند، اما زمانی که بتوان بخش‌های نوری کافی را جمع‌آوری کرد، می‌توانیم از نرم‌افزار برای بازسازی آنها در سه بعدی استفاده کنیم. این روش تجربی به طور گسترده در تحقیقات بیولوژیکی برای روشن کردن روابط پیچیده ساختاری و عملکردی بین سلول ها یا بافت ها استفاده شده است.